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其受體及細(xì)胞因子的生物學(xué)測定法

2016-06-08 [2947]

很多細(xì)胞因子針對轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及病毒感染的細(xì)胞具有溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的活性。常用的檢測細(xì)胞增殖的方法有3H-TdR摻人法、比色法、染色法和直接計數(shù)法等。檢測細(xì)胞因子促生長活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時間,然后檢測增殖的細(xì)胞數(shù)。此外,測定代謝產(chǎn)物熒光強度的方法也可檢測增殖細(xì)胞數(shù),如ATP法和cAMP法。檢測細(xì)胞因子溶細(xì)胞八田胞毒活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時間,然后檢測存活的靶細(xì)胞數(shù),酶聯(lián)免疫試劑盒并與對照比較求得溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的百分率,或以O(shè)D值對樣品稀釋度作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線,從曲線上求得相應(yīng)的待測樣品的含量。生物學(xué)活性檢測法所用的靶細(xì)胞可直接從組織中分離,如骨髓細(xì)胞的集落形成試驗和胸腺細(xì)胞(脾細(xì)胞)的增殖試驗,或用體外培養(yǎng)的依賴細(xì)胞因子才能生長的細(xì)胞因子依賴株及對細(xì)胞因子殺傷敏感的細(xì)胞作為靶細(xì)胞。細(xì)胞因子還能誘導(dǎo)靶細(xì)胞表達(dá)某些表面分子或分泌一些蛋白質(zhì),可以用熒光素標(biāo)記抗體檢測表達(dá)相應(yīng)分子的細(xì)胞數(shù),或用特定方法測定細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì),間接了解細(xì)胞因子的活性。
為了模仿?lián)頂D的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,酶聯(lián)免疫試劑盒研究人員用了多種不同數(shù)量的聚合物,以檢測它們在不同密度水平下的效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),密集的環(huán)境使基因轉(zhuǎn)錄變得對環(huán)境缺乏敏感。當(dāng)他們改變鎂、銨和亞精胺(一種能調(diào)節(jié)大分子穩(wěn)定性和結(jié)合能力的化學(xué)物質(zhì))的密度時,低密度環(huán)境下基因表達(dá)的擾動變化比在高密度環(huán)境下更大。
    論文中指出,該研究證明大分子聚集會把生物線路和人造細(xì)胞納米系統(tǒng)中的細(xì)胞成分結(jié)合在一起,從而增加了基因表達(dá)的穩(wěn)定性。酶聯(lián)免疫試劑盒研究人員認(rèn)為,這些發(fā)現(xiàn)有助于理解細(xì)胞是如何適應(yīng)分子聚集現(xiàn)象的,哪些是進(jìn)化過程中保留下來的,而這些理解可能指導(dǎo)合成生物學(xué)家將來開發(fā)出人造細(xì)胞,用于藥物遞送、生物燃料生產(chǎn)和生物傳感器等。

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