1.elisa試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭 ，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器 。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙 上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀 讀數(shù)。
5.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。|
6.建議實驗前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。|7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
操作步驟
1. 取出elisa試劑盒，于室溫（20-25℃）放置15-30分鐘。實驗過程應(yīng)在室溫（20-25℃）內(nèi)進行。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾 水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；（不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！）
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；（不含空白對照孔）
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時；（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；（不含空白對照孔）
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
11. 各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；
結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍；
4. 敏感度：0.1 ng/ml