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ELISA實驗操作試劑盒本身的影響

2019-11-22 [1263]

ELISA試劑盒在科研范疇運用尤為廣泛,它以其特異性強和靈敏度高的特征被我們所親睞,今日與我們說說ELISA試劑盒測定的進程。

ELISA試劑盒測定進程:
固相包被→加待測樣品→溫育→洗刷+加酶標物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加中止液→比色→斷定作用。
 
ELISA試劑盒操作較冗繁,在操作中應(yīng)留神以下4個方面:
1. 在成批手工檢測中,還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時刻的差異,使抗原抗體反響和酶促反響時刻不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不留神可能會導(dǎo)致差錯作用或定量禁絕。
 2. 洗刷是ELISA試劑盒操作進程中抉擇試驗勝敗的一個要害進程。意圖是除掉未結(jié)合的免疫反響物,中止抗原抗體反響,除掉標本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反響進程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)??捎孟窗鍣C洗板或手工洗板,前者洗刷質(zhì)量較好,各反響孔洗刷作用均一,批內(nèi)、批間差異小,手工洗板應(yīng)留神操控各孔洗刷作用,差異不宜太大。
3. 跟著病情的開展或由其他要素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖,因此有必要對標本進行預(yù)處理。直接法測定中,標本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。
4. 加樣一般運用加液器,在ELISA試劑盒中一般有4次加樣:加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加中止液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴,避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和中止液時則不需更換吸嘴。

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