今日揭秘ELISA技巧重點檢測有哪些
又是新的一天,11月過的可真快,仿佛剛剛開始,又到了一半了。實驗不光要注意一些事項還要學(xué)會掌握技巧,而實驗是要靠不斷的實行來積累經(jīng)驗的,ELISA試劑盒操作次數(shù)多了自然也就熟練了,而對于ELISA新手來說,在實驗之前掌握技巧可有事半功倍效果。下面就來看看研域(上海)生物今天為您推薦的文章內(nèi)容:新日揭秘ELISA檢測技巧有哪些。
如何防止常見ELISA試劑盒樣品蒸發(fā)?
試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo) 板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
研域(上海)化學(xué)技術(shù)部人員是這樣配制試劑的:
Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,ELISA試劑盒盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
加樣步驟的經(jīng)驗總結(jié):
加樣或加試劑時,請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制 在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
在ELISA檢測技巧中,研域(上海)生物建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是,ELISA試劑盒在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20min以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。
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