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1. 檢測(cè)辦法
酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以運(yùn)用鏈霉親和素符號(hào)的酶與親和素符號(hào)的一抗結(jié)合。
此外ELISA的成果檢測(cè)還包含放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。
現(xiàn)在檢測(cè)ELISA有許多途徑，我們可以依據(jù)自己的偏好進(jìn)行挑選。
一般ELISA檢測(cè)的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如一般運(yùn)用的辣根過(guò)氧化物酶HRP），而反響體系中增加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。
這種酶促反響生成具有特征性的色彩，可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。
2. 剖析抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于ELISA試劑盒，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合作用更好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有協(xié)助。
多抗可以確保捕獲一切抗原，隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。
3. 穿插發(fā)生的反響
假如抗體間發(fā)生沖突或穿插反響就會(huì)影響整個(gè)試驗(yàn)的特異性。其間抗體來(lái)歷所帶來(lái)的兼容性就是穿插反響的一個(gè)要素。
雖然現(xiàn)在購(gòu)買源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越簡(jiǎn)單，我們?nèi)杂斜匾姓J(rèn)一下是否會(huì)發(fā)生穿插反響的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)用的二抗有必要特異性針對(duì)檢測(cè)一抗，而不能與捕獲抗體起反響。
假如檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合，試驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。一般我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗，來(lái)防止上述問(wèn)題。
4、試劑盒的試驗(yàn)類型
ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培育細(xì)胞，然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞排泄的抗原構(gòu)成斑駁。此外，我們還需求依據(jù)自身需求挑選96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA試驗(yàn)。
還有兔、豬、猴、雞、鴨、羊、植物等多種種屬ELISA試劑盒，一切試劑盒通過(guò)充沛驗(yàn)證，確保有效且重復(fù)性佳。
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