建立PCR-RFLP-SSCP及測(cè)序方法，用于分析霍亂弧菌腸毒素AB（ctx-AB）基因多態(tài)性。針對(duì)ctx-AB基因設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增片段為528bp，包括ctx-B編碼基因375bp，引物序列為5′-GGT GTA AAA TTC CTT GAC G-3′和5′-GGT TCG ATG ATG AGA AGC-3′。PCR產(chǎn)物經(jīng)RsaⅠ酶切為317bp和211bp 2個(gè)片段。對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）分析，銀染色法顯示結(jié)果。對(duì)不同SSCP類型測(cè)序，利用PCR方法直接對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序。

　　霍亂弧菌O1群古典型（CVC）標(biāo)準(zhǔn)株569B和16017，埃爾托型（EVC）標(biāo)準(zhǔn)株919，O139群標(biāo)準(zhǔn)株MO45，EVC80株（廣東省90年代病人分離株），O139群10株（廣東省90年代病人分離株），由廣東省和廣州市衛(wèi)生防疫站提供。PCR擴(kuò)增ctx-AB基因，上述菌株均產(chǎn)生1條約528bp的片段，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)RsaⅠ內(nèi)切酶消化后，在2%瓊脂糖凝膠上電泳，均可見1條約317bp的片段和1條約211bp的片段。酶切產(chǎn)物經(jīng)SSCP分析，分為A和B兩個(gè)類型，CVC、EVC和O139群標(biāo)準(zhǔn)株均為A型，80株EVC（廣東省分離株）中8株為A型，其余為B型；O139群（廣東省分離株）均為A型。進(jìn)一步測(cè)序表明兩類型基因序列有3個(gè)位點(diǎn)不同，以ctx-B基因的起始?jí)A基定位為1，其下游序列為正，上游序列為負(fù)，兩類型在103、115和203位點(diǎn)堿基不同，A型為A、C和C（相應(yīng)位點(diǎn)編碼的氨基酸為Asp、Tyr和Ile），B型為G、T和T（相應(yīng)位點(diǎn)編碼的氨基酸為Asn、His和Thr）。與基因庫(kù)中霍亂弧菌的ctx-AB基因序列比較，B型103位點(diǎn)與國(guó)外報(bào)道的序列均不同，可能為廣東地區(qū)菌株*的突變。PCR-RFLP-SSCP及測(cè)序方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)，適用于對(duì)大量標(biāo)本某重要基因多態(tài)性的研究