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DNA的不同提取方法及比較
2009-9-7
3380
DNA的不同提取方法及比較傳統(tǒng)的DNA提取方法傳統(tǒng)的DNA提取與純化,如CTAB法、SDS法是在裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上,多次苯酚氯仿等有機(jī)溶劑抽提使蛋白質(zhì)變性沉淀于有機(jī)相,而核酸保留在水相,達(dá)到分離核酸的目的;加入RNA酶除去核酸中的RNA;然后加入異丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70%乙醇漂洗沉淀,除去分離過程中殘留的有機(jī)溶劑和鹽離子,以免影響核酸溶解和抑制后續(xù)步驟的酶促反應(yīng),zui后用TE溶解DNA備用。CTAB是一種陽離子去污劑,能與核酸形成復(fù)合物,此復(fù)合物在高鹽(0.7mol/...
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如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)的污染問題
2009-9-4
3263
體外培養(yǎng)的細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時(shí),有時(shí)即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預(yù)防是關(guān)鍵。只有將預(yù)防措施貫穿于整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的始終,才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手:1、從物品、用品消毒滅菌著手細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),并在取樣檢菌一周后確認(rèn)無菌才能使用。同時(shí),在無菌過濾操作中,隨著濾過體積的增大,濾膜破損的可能性增加,故應(yīng)選擇zui后過濾的液體進(jìn)行檢測。定期對二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒。具體操作:75%的酒精搽拭培養(yǎng)...
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固相萃取--樣品預(yù)處理的關(guān)鍵核心技術(shù)
2009-8-31
3275
固相萃取柱用于HPLC,GC,LC-MS/MS,GC-MS或其他技術(shù)分析樣品的制備。廣泛應(yīng)用在藥物代謝及動(dòng)力學(xué)、藥物分析、生物檢測、毒品和興奮劑檢測、食品安全分析、環(huán)境分析等領(lǐng)域。固相萃取柱應(yīng)用的科學(xué)原理很簡單:一是讓待檢測的化合物通過固相萃取柱,而讓雜質(zhì)保留在固相萃取柱上,應(yīng)用廣泛的實(shí)例包括C18,PSA,NH2固相萃取柱于農(nóng)殘分析;另一種策略就是讓雜質(zhì)穿過固相萃取柱,固相萃取柱有選擇性地濃縮和保留待檢測的化合物。固相萃取就是一種“開、關(guān)”原理,待檢測化合物要么*保留再洗脫...
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熒光定量PCR儀選擇要點(diǎn)
2009-8-26
3715
熒光定量PCR因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實(shí)驗(yàn)室成員的意見、分析實(shí)驗(yàn)室目前乃至將來的需求、平衡實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算,更要詳細(xì)研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品,您又該如何選擇呢?認(rèn)識(shí)熒光定量PCR的兩個(gè)誤區(qū):誤區(qū)一:儀器通道越多越好隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用,多重?cái)U(kuò)增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。從zu...
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抗血清的制備
2009-8-21
8378
原理:抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動(dòng)物被人工注射某類抗原后制備的動(dòng)物血清。價(jià)的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。一種抗原能否引起抗體生成反應(yīng),一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇(Antigenicdeterminant),另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài),當(dāng)具備以上兩個(gè)條件后,抗體生成將遵循抗體生成的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)??乖姆N類繁多,包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫動(dòng)物具有不同的特...
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無血清培養(yǎng)基的介紹
2009-8-17
4384
經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時(shí)間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用,這時(shí)需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子;又如需要...